鉑類抗腫瘤藥物是目前臨床常用的化療藥物。鉑類抗腫瘤藥物屬周期非特異性藥物,在體內(nèi)各組織中的分布相似,在高效殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，也具有嚴(yán)重的毒副作用。鉑類化合物抗腫瘤作用強(qiáng)，抗癌活性高毒性譜與其他藥物有所不同，易于與其它抗腫瘤藥配伍與其它抗腫瘤藥物少有交叉耐藥性，有利于臨床聯(lián)合用藥具有較廣的抗癌活性譜。四價(jià)鉑配合物具有較高的親脂性容易被癌細(xì)胞吸收，四價(jià)鉑配合物要發(fā)揮抗癌作用須先與細(xì)胞內(nèi)的還原性物質(zhì)發(fā)生氧化還原反應(yīng)，本論文主要是研究了三種在研究階段的四價(jià)鉑類復(fù)合物在缺氧的微腫瘤環(huán)境下的生物氧化還原活性，研究討論了這類四價(jià)鉑類復(fù)合物在微腫瘤缺氧環(huán)境下的的氧化還原機(jī)制。

Unisense微電極系統(tǒng)的應(yīng)用

應(yīng)用了unisense氧微電極和氧化還原電極，所使用的氧微電極和氧化還原電位電極的尖端直徑都為10微米，所使用的電極都經(jīng)過了兩點(diǎn)矯正法獲取了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中的氧微電極測(cè)試包封組織細(xì)胞培養(yǎng)基中不同位置處的楊地濃度的步徑是20um，每個(gè)樣品的測(cè)試響應(yīng)時(shí)間是4s.而氧化還原電位是在pH4-7的環(huán)境下校正后，結(jié)合參比電極測(cè)試了包封組織細(xì)胞培養(yǎng)基的氧化還原電位，測(cè)試步徑為30um，測(cè)試響應(yīng)時(shí)間是14s。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

缺氧導(dǎo)致的四價(jià)鉑配合物對(duì)于抗實(shí)體腫瘤的活性影響，研究對(duì)比了三種鉑(IV)配合物以及二價(jià)鉑配對(duì)物、賽特鉑對(duì)于缺氧和非缺氧狀態(tài)下，2D腫瘤細(xì)胞模型以及3D腫瘤細(xì)胞模型生物活性的影響，并最后通過使用SCID型老鼠模型做了相關(guān)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)表明，鉑(IV)配合物的親脂性、藥物聚集以及2D、3D細(xì)胞毒性之間存在很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性，缺氧環(huán)境狀態(tài)下，SCID老鼠模型實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)為鉑(IV)配合物活性與其藥物聚集性之間幾乎沒有關(guān)聯(lián)性。四價(jià)鉑配合物1具有最低的還原活性，而四價(jià)鉑配合物3表現(xiàn)為較高的還原活性，鉑(IV)配合物2具有適中的還原速率以及中等的親油性能，表現(xiàn)為對(duì)腫瘤有很好的抑制作用，其抗腫瘤活性能超過了已經(jīng)上市的鉑類抗腫瘤藥賽特鉑。

圖1、應(yīng)用微電極對(duì)瓊脂糖包埋的HT1080細(xì)胞和CH1/PA-1多細(xì)胞球體（直徑大于400um），純瓊脂糖培養(yǎng)基測(cè)試的一些物理化學(xué)性質(zhì)參數(shù)，其中圖A測(cè)試的是氧氣的分布情況（測(cè)量步徑為20um），圖B測(cè)試的是pH（測(cè)量步徑為40um），圖C測(cè)試的是氧化還原電位（測(cè)量步徑為40um）。從圖中可以看出，在培養(yǎng)基球體中心位置的氧氣濃度、pH、以及氧化還原電位均最低，而純瓊脂糖的氧氣濃度、pH則是呈現(xiàn)逐漸降低的趨勢(shì)。

圖2、應(yīng)用微電極對(duì)瓊脂糖包埋的HCT116細(xì)胞純瓊脂糖培養(yǎng)基測(cè)試的一些物理化學(xué)性質(zhì)參數(shù)，其中圖A測(cè)試的是氧氣的分布情況（測(cè)量步徑為20um），圖B測(cè)試的是pH（測(cè)量步徑為40um），圖C測(cè)試的是氧化還原電位（測(cè)量步徑為40um）。從圖中可以看出，瓊脂糖包埋的HCT116細(xì)胞體內(nèi)的氧氣濃度、pH、氧化還原電位是呈現(xiàn)逐漸降低然后在慢慢增加。并且表現(xiàn)為在球體中央?yún)^(qū)域內(nèi)的氧氣濃度、pH、氧化電位值最低。

圖3、四價(jià)鉑復(fù)合物1、2在缺氧和非缺氧狀態(tài)下的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)。其中圖A表示的不同濃度抗腫瘤藥物四價(jià)鉑復(fù)合物1加入后，在是缺氧和非缺氧狀態(tài)下CH1/PA-1活細(xì)胞濃度變化曲線，圖B表示的是不同濃度抗腫瘤藥物四價(jià)鉑復(fù)合物1加入后，在缺氧和非缺氧狀態(tài)下的HT1080活細(xì)胞濃度變化情況。從圖中的趨勢(shì)可以看出，隨著四價(jià)鉑復(fù)合物的濃度增加，活細(xì)胞數(shù)逐漸降低，并且在低氧濃度下，同意當(dāng)量的鉑復(fù)合物的加入導(dǎo)致的活細(xì)胞數(shù)量下降的更快。

圖4、HT1080細(xì)胞經(jīng)過四價(jià)鉑配合物（1、2）處理后，包封瓊脂球體內(nèi)的鉑的濃度分布情況。其中圖A表的是經(jīng)過四價(jià)鉑配合物1處理后的HT1080細(xì)胞內(nèi)的鉑含量分布，圖B表示的是經(jīng)過四價(jià)鉑配合物1處理后的HT1080細(xì)胞內(nèi)的鉑含量分布，圖C表示的是使用賽特鉑處理后的細(xì)胞內(nèi)的鉑含量分布。其中激光I燒蝕CP-MS測(cè)試的是使用了20um厚的冰凍切片樣品。

圖5、圖A表示的是在老鼠活體內(nèi)注入克分子數(shù)計(jì)量四價(jià)鉑類化合物1、2、賽特鉑化合物后，對(duì)于老鼠HT1080皮下細(xì)胞腫瘤在0-15天時(shí)間段內(nèi)，腫瘤體積或重量的變化情況。圖B表示的是老鼠HT1080皮下皮下細(xì)胞腫瘤對(duì)于不同四價(jià)鉑類復(fù)合物的在第十五天時(shí)的腫瘤的重量情況。圖C表示的是實(shí)驗(yàn)老鼠注入了不同的四價(jià)鉑復(fù)合物后，老鼠在0-15的時(shí)間段老鼠的重量變化情況。圖D表示的是使用了ICP-MS分析老鼠不同器官組織體內(nèi)的鉑的含量。

總結(jié)

本論文主要研究的是在缺氧狀態(tài)下的2D、3D細(xì)胞模型下，四價(jià)鉑配合物的抗腫瘤活性、細(xì)胞毒性的性能之間的相關(guān)性。結(jié)合癌細(xì)胞2D、3D模型研究了四價(jià)鉑配合物的相關(guān)抗癌活性，以及在缺氧狀態(tài)下其氧化還原活性對(duì)于腫瘤組織的影響。論文研究過程中使用了unisense氧氣微電極測(cè)試了包封癌細(xì)胞組織培養(yǎng)基體系內(nèi)不去區(qū)域位置的氧氣濃度，并同時(shí)使用了氧化還原電極測(cè)試了包封癌細(xì)胞組織培養(yǎng)基體系的氧化還原電位值的變化情況。微電極的使用使得相關(guān)研究者能夠很好的探索鉑(IV)配合物在腫瘤缺氧模型中的行為下的氧化還原性能以及抗腫瘤性能的影響情況，從而為今后臨床究這類鉑(IV)配合物在今后抗腫瘤治療中發(fā)揮更高的療效。這也說明unisense微電極系統(tǒng)在研究腫瘤類藥物活性以及抗腫瘤機(jī)制的研究領(lǐng)域存在著很好的應(yīng)用前景。