結(jié)果

方法評(píng)價(jià)

實(shí)驗(yàn)1-測試方法。氧內(nèi)流和傳感器穩(wěn)定性的控制實(shí)驗(yàn)。低O2濃度下的耗氧量測定要求極高的精度，且裝置完全不受外部和內(nèi)部O2污染[31]。為了確定低O2水平下的耗氧量，我們開發(fā)了一個(gè)全玻璃培養(yǎng)瓶，易于接近傳感器，其中唯一可能的O2進(jìn)入是通過25 cm長的壓力補(bǔ)償毛細(xì)管和傳感器與8 mm玻璃管之間的薄水膜（圖1）。壓力補(bǔ)償管的寬度為2.5 mm，根據(jù)菲克第一定律（方程式S1，文本S1）計(jì)算的氧氣流量導(dǎo)致平衡時(shí)的輸入為0.05 nmol L-1 h-1，這是完全可以忽略的。從孵育開始，試管中的水與散裝水中的O2濃度相同，如果擴(kuò)散是唯一的運(yùn)輸方式，則在許多月內(nèi)不會(huì)達(dá)到平衡[32]。然而，水的粘度確實(shí)會(huì)隨著溫度的升高而降低，因此可能需要在較高溫度下使用內(nèi)徑較小的壓力補(bǔ)償管，以盡量減少湍流混合。除了湍流混合外，通過壓力補(bǔ)償管的輸送也可能因溫度變化而增加，從而導(dǎo)致管內(nèi)的水移動(dòng)。管道中的水流沿管壁流動(dòng)較慢，因此任何水流都會(huì)促進(jìn)混合。另一個(gè)入口點(diǎn)是STOX傳感器和周圍玻璃管之間的水膜。假設(shè)水膜厚度為0.05 mm，在0.3 cm長的管中，在平衡狀態(tài)下，只有0.02 nmol L-1 O2 h-1通過擴(kuò)散通過該膜。然而，與壓力補(bǔ)償管一樣，我們不能排除湍流混合的可能性，例如由振動(dòng)泵引起的湍流混合。因此，由于我們無法排除與大氣開放連接中的各種混合，我們決定通過使用生物滅活的0.05 M HCl脫鹽水進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)，測試是否可能泄漏到培養(yǎng)瓶中，該脫鹽水已煮沸、冷卻，然后用N2氣體脫氣至低O2水平。瓶內(nèi)的氧氣濃度（n=4）在0.60小時(shí)內(nèi)沒有增加（圖2），這證實(shí)沒有氧氣泄漏。另一方面，在孵化過程中，傳感器信號(hào)略有下降。根據(jù)特定的傳感器，我們記錄到信號(hào)的減少（培養(yǎng)64小時(shí)后），范圍為初始值的2.2%到21.3%（前5小時(shí)內(nèi)信號(hào)的平均值）。因此，對(duì)于培養(yǎng)持續(xù)14小時(shí)的實(shí)驗(yàn)，應(yīng)考慮約1.8%的信號(hào)平均漂移。漂移在很大程度上取決于傳感器的特定特性，因此，僅使用在使用前經(jīng)過徹底測試并保持極化數(shù)小時(shí)的傳感器，可以將漂移降至最低。然而，傳感器漂移似乎只導(dǎo)致測得的O2濃度下降的一部分。更詳細(xì)地分析圖2中的數(shù)據(jù)，似乎瓶子中氧氣的減少：STOX 1、2、3和4分別為0.14、0.07、0.04和0.15 nmol L-1 h-1（圖2），與初始氧氣濃度沒有強(qiáng)相關(guān)性。因此，似乎大部分減少可能是由于我們無法完全停止氧氣消耗，無論是生物還是化學(xué)。在這里，我們?cè)跐舛群徒^對(duì)速率范圍內(nèi)工作，控制實(shí)驗(yàn)很困難，但基于大氣濃度下的低傳感器信號(hào)漂移速率[19]，如STOX 1（圖2）中所觀察到的，3天內(nèi)信號(hào)漂移約三分之一的可能性也很小。因此，我們對(duì)孵化期間真實(shí)傳感器漂移的最佳估計(jì)為每14小時(shí)2%。

圖4。氧氣消耗率與1號(hào)站的氧氣濃度（Randers峽灣，2011年9月）。每種類型的符號(hào)對(duì)應(yīng)一個(gè)特定的瓶子。復(fù)制瓶在初始O2濃度范圍內(nèi)（從0到20 mmol L-1）孵育。速率計(jì)算為不同O2濃度變化間隔的斜率：每2 mmol L-1間隔為17-6 mmol O2，每1 mmol L-1間隔為6-1 mmol L-1 O2。然后在以下時(shí)間間隔內(nèi)：500-300、300-100和100-5 nmol-1。內(nèi)政部：10.1371/期刊。波內(nèi)。0105399.g004

實(shí)驗(yàn)2-方法在沿海水域的應(yīng)用和比較。通過測量丹麥沿海水域3個(gè)不同站點(diǎn)和3個(gè)不同季節(jié)的CR率，對(duì)該方法進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)測試，以覆蓋群落組成和代謝水平的最小變化。本研究的兩個(gè)主要站點(diǎn)（圣約翰海峽1號(hào)站和圣約翰海峽2號(hào)站，Marselisborg Marina，圖S1）分別于6月、7月、9月和1月取樣，并進(jìn)行了三組反應(yīng)堆試驗(yàn)。由于我們的方法允許隨著時(shí)間的推移連續(xù)記錄氧氣濃度，因此我們能夠以高分辨率而非少量點(diǎn)監(jiān)測和分析氧氣消耗過程（圖3）。因此，可以評(píng)估反應(yīng)器中氧氣的減少是線性的，從高氧氣濃度下降到氧氣濃度#1 mmol L-1。在大范圍O2濃度的培養(yǎng)過程中，呼吸速率似乎與矩形雙曲線的一般形狀相匹配（圖4），并遵循Michaelis-Menten動(dòng)力學(xué)。使用公式2（圖5）通過曲線擬合確定參數(shù)Vmax和Km。表1報(bào)告了三個(gè)研究期間St.1和St.2的估算Vmax值和表觀半飽和濃度Km。

圖5。沿海海水樣品中氧氣消耗曲線的建模示例。2011年9月，來自圣二號(hào)碼頭（Marselisborg Marina）的三個(gè)培養(yǎng)瓶（4、6、7）的耗氧實(shí)驗(yàn)。氧氣耗盡后（6小時(shí)），將空氣飽和水注入“STOX 7”瓶中。點(diǎn)顯示STOX傳感器記錄的O2值。最大速率（Vmax）和半飽和常數(shù)（Km）通過最小二乘擬合（紅色實(shí)線）確定，使用公式（2），源自Michaelis-Menten動(dòng)力學(xué)。該方法的擬合度相對(duì)較差，可能導(dǎo)致低估“STOX 6”的Km值。內(nèi)政部：10.1371/期刊。波內(nèi)。0105399.g005

在氧濃度降低時(shí)，通過STOX傳感器法測量的呼吸率和在空氣飽和時(shí)通過溫克勒滴定法測量的呼吸率得出了類似的結(jié)果。事實(shí)上，這兩種方法記錄的氧氣吸收率大致相同，只要裝有STOX傳感器的瓶子中的氧氣濃度高于500-200 nmol L-1，這取決于不同的群體（圖6）。低于這些值時(shí)，呼吸速率取決于O2濃度，表明群落正在接近其表觀Km值。2013年冬季，對(duì)北海的St.1和St.2以及額外的St.3進(jìn)行了方法比較，結(jié)果相似（圖6）。來自St.1、St.2和St.3的樣品暴露于2–0.5 mmol L-1的O2濃度下，其吸氧率與暴露于285 mmol L-1 O2的樣品相似（在標(biāo)準(zhǔn)誤差范圍內(nèi)）。

因此，分別使用STOX傳感器和Winkler滴定法進(jìn)行測量，得出以下呼吸速率6標(biāo)準(zhǔn)誤差（n）：對(duì)于St.1，196.869（3）nmol L-1 h-1和203.8627（3）nmol L-1 h-1；對(duì)于St.2，163.562（13）nmol L-1 h-1和172.768.5（4）nmol L-1 h-1；對(duì)于St.3，98.664.9（6）nmol L-1 h-1和117.7613.5（4）nmol L-1 h-1。對(duì)于St.2浮游生物群落，在較低O2濃度（#500 nmol L-1）下進(jìn)行的孵化似乎在略低于暴露于較高O2濃度（#2 mmol L-1）下的孵化達(dá)到最大速率（圖6 D和F）。

耗氧和隨后注入空氣飽和水后測定的表觀Km值與6月和9月St.1第一次耗氧曲線所得值相似。具體而言，對(duì)于6月的St.1，第一次消耗曲線的平均視在Km值6 St.誤差（n）為83611（3）nmol L-1 O2，在添加約1 mmol L-1 O2及其后續(xù)消耗后，視在Km值為118625（3）nmol L-1 O2。9月，注入約0.5 mmol L-1 O2后，表觀Km值首先為73625（3），然后為85626（3）nmol L-1 O2。然而，對(duì)于9月的St.2，第二次耗氧曲線導(dǎo)致表觀Km值從第一次運(yùn)行的179增加到第二次運(yùn)行的310 nmol L-1 O2（表1和圖5“STOX 7”）。

表1。測量的社區(qū)呼吸率概述。

只有當(dāng)瓶子中的氧氣濃度達(dá)到納摩爾范圍時(shí)，St.1和St.2的呼吸速率才會(huì)顯著降低，對(duì)應(yīng)于259-90 nmol-1 O2之間的氧氣呼吸微生物群落的表觀Km值。在夏季/秋季/冬季，這兩個(gè)地點(diǎn)的估算Vmax值不同（表1），在186和761 nmol-1 h-1之間變化。通過根據(jù)從Jassby和Platt經(jīng)驗(yàn)方法得出的數(shù)學(xué)函數(shù)（等式6）對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行建模，獲得了Km和Vmax的類似值，但總體而言，動(dòng)力學(xué)參數(shù)稍低，從而更好地描述了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)（圖S3）。使用這種方法，估計(jì)的Vmax值比使用Michaelis-Menten模型獲得的值更符合實(shí)際測量的呼吸率（CR）。這兩個(gè)位置顯示出相同的CR季節(jié)模式：夏季/秋季/冬季：605/262/223 nmol h-1（St.1）和238/206/156 nmol L-1 h-1（St.2），Km值在155-66 nmol L-1 O2之間變化。葉綠素a濃度（葉綠素a–表1）顯示，浮游植物群落的豐度隨季節(jié)的變化而變化，在St.1和St.2之間也有變化。截至目前，2011年6月Randers峽灣（St.1）樣本中的chl a濃度最高，其呼吸速率也遠(yuǎn)高于其他樣本（表1）。發(fā)現(xiàn)St.1的chl A濃度和CR之間存在線性相關(guān)（r2=0.99）。

實(shí)驗(yàn)3-海洋水域中的方法應(yīng)用。該方法通過測量船上實(shí)驗(yàn)中的鉻率，在海洋水樣上進(jìn)行了測試。水樣在不同的瓶中以不同的氧氣水平孵化（圖7）。在培養(yǎng)14小時(shí)后，在三個(gè)重復(fù)瓶中檢測到線性氧氣下降。重復(fù)試驗(yàn)中的呼吸率相似，平均值為7.460.3（3）nmol L-1 h-1，與暴露時(shí)的O2水平（950/270/100 nmol L-1）無關(guān)。這表明該群落的Km值明顯低于100 nmol L-1。

圖6。用STOX法和溫克勒滴定法測量鉻率的比較。通過STOX法（從0到2 mmol L-1，白色條）和溫克勒滴定法（在空氣飽和時(shí)，灰色條）測量不同O2濃度（B、D、F、H）下培養(yǎng)期間的耗氧時(shí)間過程（A、C、E、G）和呼吸速率。A、B：圣1號(hào)（蘭德斯峽灣）；C、D：濃度為0-2 mmol L-1的圣2號(hào)（Marselisborg Marina）和E，F(xiàn)：濃度為0-1 mmol L-1的Marselisborg Marina。G、H:St.3（漢斯霍姆）。比率平均為6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)誤差（n=3）。Michaelis-Menten動(dòng)力學(xué)參數(shù)和Jassby和Platt動(dòng)力學(xué)參數(shù)（括號(hào)內(nèi)）均已給出。內(nèi)政部：10.1371/期刊。波內(nèi)。0105399.g006

討論

在這項(xiàng)研究中，我們提出了一種測定浮游生物群落有氧呼吸速率的新方法，將超靈敏O2測定（在本例中是通過STOX傳感器）與人工降低O2濃度的瓶培養(yǎng)相結(jié)合。通過該方法，氧氣消耗率的分辨率與STOX傳感器最佳工作范圍內(nèi)的氧氣濃度成反比，即從飽和降至約10 nmol L-1 O2。假設(shè)14小時(shí)間隔內(nèi)的信號(hào)漂移小于2%（圖2），在100 nmol L-1 O2下可獲得約0.4 nmol L-1 h-1的呼吸速率檢測限，并且在500 nmol L-1 O2下可獲得約2 nmol L-1 h-1的分辨率。這應(yīng)與溫克勒滴定法進(jìn)行比較，溫克勒滴定法的初始值和最終值之差的準(zhǔn)確度最多為0.15 mmol L-1[2]。對(duì)于14小時(shí)的培養(yǎng)，這對(duì)應(yīng)于約10 nmol L-1 h-1的檢測限。培養(yǎng)時(shí)間的延長降低了Winkler方法的檢測限，比本文介紹的基于STOX的方法要低得多，但我們發(fā)現(xiàn)，如果培養(yǎng)時(shí)間超過20小時(shí)，呼吸速率會(huì)增加數(shù)倍[22]。因此，與之前的直接測量相比，基于STOX的方法將O2呼吸測量的靈敏度提高了一個(gè)數(shù)量級(jí)以上。因此，它還允許測定深海水域、貧營養(yǎng)區(qū)和缺氧區(qū)的極低速率，低至約1 nmol-1 h-1[33]。對(duì)于居住在墨西哥海岸附近ETNP OMZ中間深度的浮游生物群落，在14小時(shí)長的瓶培養(yǎng)過程中測量了低于10 nmol L-1 h-1的CR率（圖7）。

圖7。與海洋海水孵育的STOX傳感器中氧氣消耗的時(shí)間過程。2012年4月，在海洋站4號(hào)進(jìn)行的船上實(shí)驗(yàn)中，在3個(gè)重復(fù)瓶中氧氣消耗的時(shí)間過程。在3種不同DO水平下孵育的3個(gè)樣品的CR率相似（nmol-1 h-1）。CR率6標(biāo)準(zhǔn)誤差通過線性回歸確定，實(shí)驗(yàn)的前三個(gè)小時(shí)由于傳感器信號(hào)上的噪聲而被丟棄。內(nèi)政部：10.1371/期刊。波內(nèi)。0105399.g007

用這種方法測得的速率與傳統(tǒng)溫克勒滴定法測得的速率之間有很好的一致性（圖6），證實(shí)了這種新方法的有效性。此外，該協(xié)議表明，通過在短時(shí)間間隔內(nèi)人為降低樣品中的氧濃度，對(duì)CR率缺乏可檢測的直接影響；只要樣品暴露在明顯高于社區(qū)Km值的環(huán)境中。此外，該方法具有高分辨率和連續(xù)測量耗氧量的特點(diǎn)，為研究自然樣品中的動(dòng)力學(xué)參數(shù)以及浮游生物群落對(duì)不同O2水平的響應(yīng)提供了獨(dú)特的可能性。

丹麥三個(gè)測站（圖S1）（0.16–0.8 mmol L-1 O2 h-1）測得的呼吸速率與先前對(duì)公海上層混合層的估計(jì)或測量值處于相同范圍[1]。研究發(fā)現(xiàn)，調(diào)查沿海地區(qū)的地表水（，10 m）的平均呼吸速率為0.3 mmol L-1 O2 h-1，相當(dāng)于沿海海洋地區(qū)組合數(shù)據(jù)集（0.3 mmol L-1 O2 h-1）的先前平均值[2,16,34]。這些監(jiān)測站表現(xiàn)出不同程度的活動(dòng)，正如人們所預(yù)期的那樣，這些地點(diǎn)受到不同程度的富營養(yǎng)化和有機(jī)負(fù)荷的影響。St.1位于一個(gè)長而淺的河口，受兩條有機(jī)負(fù)荷較高的河流排放的淡水的影響[21]，其吸收率最高，并且可能有一個(gè)非?；钴S的浮游生物群落。表現(xiàn)出較低呼吸率的St.2位于奧胡斯港外的沿?？ㄌ丶犹睾Ｋ?，有機(jī)負(fù)荷較低，浮游生物群落密度較低；St.3位于北海相對(duì)不太活躍的水域。最后，St.4是在開闊海域發(fā)現(xiàn)的低流速的一個(gè)例子。St.4處仍然相對(duì)較高的耗氧量可歸因于取樣深度（110 m）處存在深層次葉綠素最大值，同時(shí)細(xì)胞密度較高（參見Ulloa等人2012[35]，了解次葉綠素最大值的一般描述）。此外，呼吸速率的差異也反映了浮游生物活動(dòng)的季節(jié)性，夏季較高，秋季和冬季較低，與chl a濃度的季節(jié)性波動(dòng)趨勢相似（表1）。

然而，本次調(diào)查的目的不是為了確定丹麥沿海水域的準(zhǔn)確呼吸速率，而是為了調(diào)查使用人工降低O2濃度的水測定呼吸速率的方法的有效性，以及測定低O2濃度下海洋和河口水中O2吸收的動(dòng)力學(xué)。因此，我們沒有試圖密切模擬現(xiàn)場溫度條件，也沒有研究呼吸速率隨晝間光周期的變化，因?yàn)楣庵芷趧傔^，呼吸通常較高[36]。我們決定通過直接建模氧氣濃度隨時(shí)間的變化來估計(jì)氧氣吸收的動(dòng)力學(xué)參數(shù)，以避免線性化過程[37]的不準(zhǔn)確和限制，以及使用因變量和推斷值（即斜率）代替測量值的連續(xù)誤差。Michaelis-Menten模型似乎對(duì)所調(diào)查的混合浮游生物群落的動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了合理的描述，盡管該方程并不嚴(yán)格適用于具有不同動(dòng)力學(xué)參數(shù)的異質(zhì)種群[38]。

通過應(yīng)用米氏動(dòng)力學(xué)，我們假設(shè)聚集體中的擴(kuò)散限制可以忽略。事實(shí)上，當(dāng)細(xì)菌聚集時(shí)，由于鄰近生物體的消耗，它們會(huì)經(jīng)歷較低的外部O2濃度。在厚生物膜的極端情況下，O2的吸收可以用半級(jí)動(dòng)力學(xué)來描述[39]。浮游生物群落中總會(huì)有一些聚集，這將導(dǎo)致明顯的Km值高于細(xì)胞值。隨著電池尺寸的增加，擴(kuò)散到電池的效率降低[40]，因此，我們可以預(yù)期大型電池的表觀Km值會(huì)更高。然而，海水中群落呼吸的主要部分（.70%）可歸因于尺寸等級(jí)為10 mm的生物體，而尺寸等級(jí)小于1 mm的生物體高達(dá)58%，通常以細(xì)菌為主[41–44]。由于未完全滿足Michaelis-Menten模型的假設(shè)，使用公式2建模的曲線與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)非常吻合，但導(dǎo)致建模的Vmax與實(shí)驗(yàn)檢測到的最大呼吸值不匹配。因此，我們嘗試應(yīng)用Jassby和Platt（1976）的經(jīng)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，在這種情況下，我們發(fā)現(xiàn)了更好的一致性。兩種模型之間的主要區(qū)別在于，對(duì)于相同的假設(shè)Km值，通過改進(jìn)的Jassy和Platt模型，在較低濃度下接近最大速率（Vmax）（圖S3）。開發(fā)原始模型是為了更好地模擬混合微生物群落的行為，如本研究中所研究的微生物群落。

在我們的反應(yīng)堆實(shí)驗(yàn)中估算的表觀Km值低于之前報(bào)告的海洋細(xì)菌[45]。然而，在這個(gè)數(shù)量級(jí)上，O2的半飽和常數(shù)在微生物界是一個(gè)廣泛存在的現(xiàn)象[46–49]，以及通過高親和力末端氧化酶從極低O2濃度下的有氧呼吸中獲取能量的能力[49–51]。事實(shí)上，O2的還原是一種（火用）反應(yīng)，它可以提供足夠的自由能，以在極低O2濃度下為細(xì)胞過程提供燃料[50]。因此，毫不奇怪，只要氧氣可用，微生物就可以使用氧氣作為電子受體，即使?jié)舛戎挥袔准{摩爾[52]。

對(duì)來自公海和沿海地區(qū)的海洋樣品進(jìn)行的元基因組分析表明，Km值為幾納摩爾的高親和力末端氧化酶的豐度非常低，而對(duì)培養(yǎng)細(xì)菌的分析表明，在734個(gè)受調(diào)查需氧菌中，93%存在此類氧化酶[49]。海水中缺乏這種高親和力末端氧化酶并不令人驚訝，因?yàn)榇蟛糠趾Ｑ蠖际峭耆卸镜模挥袆?dòng)物內(nèi)臟中的細(xì)菌[53]，大型糞便顆粒和海洋聚集體中的細(xì)菌[54–56]暴露在高度降低的環(huán)境O2濃度下，它們可能會(huì)經(jīng)歷納摩爾范圍內(nèi)的O2濃度。另一方面，Kalvelage等人最近在含氧量最低的水域中報(bào)道了高親和力末端氧化酶[57]。然而，低親和力末端氧化酶的Km值約為200 nmol L-1，因此即使沒有任何高親和力末端氧化酶的浮游生物群落也可能具有如此低的Km值。我們的一些數(shù)據(jù)也表明，細(xì)菌群落更為多樣的沿海環(huán)境和低氧適應(yīng)群落的海洋最低含氧量區(qū)的特征是明顯的Km值略低于200 nmol L-1。

呼吸速率可能與水的預(yù)處理有關(guān)。這可以從第二次耗氧實(shí)驗(yàn)（圖5和表1:St.2*，2011年9月，6–14小時(shí)）中對(duì)Km值的不同估計(jì)中看出。長期暴露于完全缺氧是應(yīng)該避免的一個(gè)因素，因?yàn)樗ǔ?huì)導(dǎo)致非常不同的速率和Km值。此外，由于應(yīng)允許社區(qū)適應(yīng)新的條件，應(yīng)丟棄孵化前1-2小時(shí)的數(shù)據(jù)[58]。建議使用2至16小時(shí)的數(shù)據(jù)確定動(dòng)力學(xué)參數(shù)。超過16–20小時(shí)的孵化可能會(huì)導(dǎo)致高度錯(cuò)誤的數(shù)據(jù)，至少在公海水樣中是如此（L.Tiano等人在準(zhǔn)備中）[22]。

我們意識(shí)到微生物過程體外測量的局限性[15,16,59]，但在所介紹的裝置中使用STOX傳感器為解決與先前測定海水呼吸速率相關(guān)的幾個(gè)問題提供了一個(gè)極好的解決方案。事實(shí)上，它是一種實(shí)時(shí)評(píng)估浮游呼吸的簡單而準(zhǔn)確的方法，不需要使用轉(zhuǎn)換因子和估計(jì)值。例如，電子傳輸系統(tǒng)（ETS）方法是一種間接方法，必須通過經(jīng)驗(yàn)確定的算法將測量的潛在呼吸率轉(zhuǎn)換為體內(nèi)呼吸率[60]。另一種間接方法是根據(jù)顆粒有機(jī)物（POM）通量進(jìn)行估算[33]，這種估算受到許多偏差的影響[5,61]。

STOX傳感器的高靈敏度允許非常短的培養(yǎng)時(shí)間。此外，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，反應(yīng)器中O2的減少在濃度超過估計(jì)Km值三倍時(shí)呈線性，這意味著穩(wěn)定狀態(tài)社區(qū)[16]。因此，我們排除了通常與長期孵化相關(guān)的社區(qū)組成的重大變化[62]。

電化學(xué)傳感器已應(yīng)用于本研究中，但也有可能使用新一代光電二極管。這些新開發(fā)的非常靈敏的光電二極管是STOX傳感器的一種有價(jià)值的替代品[20]。無論是否使用電化學(xué)傳感器或光電二極管，都應(yīng)在記錄氧氣消耗前后進(jìn)行仔細(xì)的現(xiàn)場校準(zhǔn)，以驗(yàn)證傳感器是否存在污垢。事實(shí)上，聚集體可能在STOX傳感器的尖端周圍形成；這種現(xiàn)象在富含硅藻的沿海水域（L.Tiano，個(gè)人觀察）中觀察到，光電極表面可能形成生物膜，從而導(dǎo)致錯(cuò)誤的測量。

通過使用本文所述的技術(shù)，可以比較O2吸收速率與其他微生物代謝過程的速率，如通過高分辨率15N同位素技術(shù)獲得的N-轉(zhuǎn)化速率，并研究從有氧呼吸到無氧呼吸的轉(zhuǎn)換[63,64]。我們現(xiàn)在還可以詳細(xì)研究定義的低O2濃度如何影響自然環(huán)境（如海水（T.Dalsgaard，個(gè)人交流）或純培養(yǎng)物中的基因表達(dá)[22]。

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圖S1采樣點(diǎn)地圖。STOX培養(yǎng)方法通過來自丹麥沿海和峽灣水域3個(gè)站點(diǎn)的樣本進(jìn)行測試（左側(cè)地圖）。丹麥采樣地點(diǎn)（N）：1號(hào)站、蘭德斯峽灣、2號(hào)站、馬塞利斯堡碼頭、3號(hào)站、漢斯霍姆。所有樣本均在距海岸線100 m的范圍內(nèi)采集。該方法還用于評(píng)估熱帶北太平洋東部（ETNP）氧氣最低區(qū)（右側(cè)地圖）水樣中的浮游生物群落呼吸速率。4號(hào)站，距離墨西哥海岸700公里。該地圖顯示了代表150 m深度處以飽和度百分比表示的氧濃度的等高線，氧數(shù)據(jù)來自2009年世界海洋地圖集，美國國家海洋數(shù)據(jù)中心（海洋數(shù)據(jù)視圖）。（TIFF）

圖S2孵化裝置示意圖。監(jiān)測氧氣消耗的設(shè)置，包括：1）換檔箱。2）前護(hù)罩的電源。3）ACD816bit A/D轉(zhuǎn)換器（Unisense A/S）、4）PA8000多通道皮安計(jì)（Unisense A/S）、5）計(jì)算機(jī)、6）磁攪拌器（IKA、實(shí)驗(yàn)室光盤）上的水浴，其中包含裝有STOX傳感器和玻璃涂層磁鐵的玻璃瓶。在大約一米的實(shí)驗(yàn)臺(tái)空間上，可以安裝實(shí)驗(yàn)所需的所有設(shè)備，最多8個(gè)復(fù)制瓶和8個(gè)STOX傳感器。（TIFF）

圖S3動(dòng)力學(xué)模型的比較。上圖：呼吸速率與氧氣濃度，使用相同固定參數(shù)比較Michaelis-Menten和Jassby及Platt方程。下圖：第2站一個(gè)樣本孵化過程中氧濃度的時(shí)間演變，以及比較Michaelis-Menten、Jassby和Platt方程，使用100%氧飽和度（173 nmol L-1 h-1）下測得的呼吸速率作為Vmax。（TIFF）

文本S1 STOX傳感器的耗氧量。（DOC）

文本S2不同動(dòng)力學(xué)模型使用的比較和評(píng)估。（DOC）