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1、凱氏定氮法
準(zhǔn)備4個(gè)50mL凱氏燒瓶并標(biāo)號(hào),想1、2號(hào)燒瓶中加入定量的蛋白質(zhì)樣品,另外兩個(gè)燒瓶作為對(duì)照,在每個(gè)燒瓶中加入硫酸鉀-硫酸銅混合物,再加入濃硫酸,將4個(gè)燒瓶放到消化架上進(jìn)行消化。
消化完畢后進(jìn)行蒸餾,全部蒸餾完畢后用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定各燒瓶中收集的氨量,直至指示劑混合液由綠色變回淡紫紅色,即為滴定終點(diǎn),結(jié)算出蛋白質(zhì)含量。
2、雙縮脲法
雙縮脲法是第一個(gè)用比色法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的方法,硫銨不干擾顯色, Cu2+與蛋白質(zhì)的肽鍵,以及酪氨酸殘基絡(luò)合,形成紫藍(lán)色絡(luò)合物,此物在540nm波長(zhǎng)處有最大吸收。
利用標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液和雙縮脲試劑繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,將待測(cè)血清與硫酸鈉在待測(cè)試管中混合,并只加入硫酸鈉不含血清的試管作對(duì)照,將兩支試管加入等量的雙縮脲試劑,混合后于37℃環(huán)境中放置10分鐘,在540nm波長(zhǎng)進(jìn)行比色,以對(duì)照管調(diào)零,讀取吸光度值,標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接查出蛋白質(zhì)含量。
3、酚試劑法
取6支試管標(biāo)號(hào),前5支試管分別加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液,最后一支試管加待測(cè)蛋白質(zhì)溶液,不加標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液,每支試管液體總量加入蒸餾水補(bǔ)足而保持一致,混合均勻,在室溫下放置30分鐘,以未加蛋白質(zhì)溶液的第一支試管作為空白對(duì)照,于650nm波長(zhǎng)處測(cè)定各管中溶液的吸光度值。